国产一二三四区乱码免费,国产亚洲男人社区堂在线观看视频,在线亚洲欧美+日本专区,手机看片国产日韩 日韩欧美

15522676233
DATA DOWNLOAD

資料下載

當前位置:首頁資料下載親和層析(AC)實驗步驟及注意事項

親和層析(AC)實驗步驟及注意事項

發(fā)布時間:2023/7/7點擊次數(shù):2096

原理

通過生物分子之間的特異性相互作用來分離物質(zhì)的一種層析方法。包括基于空間結(jié)構(gòu)特異結(jié)合的抗原/抗體,酶/底物、底物類似物、抑制劑、激活劑、輔因子,激素/受體,核酸/核酸結(jié)合蛋白、互補核酸序列,和基于電子的供體和受體相互作用的金屬螯合、嗜硫親和等。該分離純化蛋白的方法高效、簡單、快速、選擇性高。

用途

分離、純化蛋白

材料與儀器

樣品;親和層析柱;結(jié)合緩沖液;洗脫緩沖液。

步驟

準備層析柱,根據(jù)目標蛋白量和填料載量確定柱體積;

準備樣品,通過過濾或離心除去顆粒性物質(zhì),確保樣品中不含干擾結(jié)合的物質(zhì),根據(jù)不同的親和層析類型調(diào)整上樣緩沖液 pH

上樣前用上樣緩沖液平衡柱子或珠子,柱子需根據(jù)結(jié)合能力強弱確定上樣流速;

孵育,對于親和磁珠需將樣品、抗體、珠子 4℃ 孵育一段時間后再進行洗脫;

洗脫,對于組蛋白標簽蛋白采用咪唑或低 pH 鹽溶液洗脫、對于 GST 融合蛋白采用含 10-20 mM 還原性谷胱甘肽的溶液洗脫、對于金黃色葡萄球菌蛋白 A 采用低 pH 鹽溶液洗脫;

對于親和層析柱可以用結(jié)合緩沖液重新平衡柱子或用儲存液沖洗柱子,再生利用。

注意事項

1、帶不同標簽的待純化蛋白要根據(jù)標簽的差異選擇不同的洗脫方法,常用的洗脫緩沖液有高鹽洗脫液、低 pH 洗脫液、還原谷胱甘肽洗脫緩沖液、EDTA 洗脫液等;

2、Ni 親和層析柱可分為 Ni-IDA (螯合三價)Ni-NTA (螯合四價),IDA 載量要比 NTA 高,IDA 與蛋白結(jié)合能力弱、穩(wěn)定性差、Ni易脫落,純化回收 His 標簽蛋白選擇螯合鎳更穩(wěn)定、更耐受還原劑、特異性更高的 NTA 層析柱更好;

3GST 親和層析的條件更溫和、更能保證蛋白活性;

4、純化回收過程中要添加穩(wěn)定蛋白的蛋白酶抑制劑、根據(jù)親和原理合理添加金屬螯合劑、離子穩(wěn)定劑和還原劑。

常見問題

1Ni 柱進行蛋白純化需要注意什么?

緩沖液中不能有高濃度的電子供體基團、不能有強螯合劑、不能有高濃度強還原劑、不能含離子型去垢劑、避免含碳酸氫鈉等物質(zhì);

2、GST 蛋白純化需要注意什么?

避免蛋白樣品超聲太劇烈或時間過長引起的蛋白變性,增加洗脫緩沖液的 pH 值可在不增加還原谷胱甘肽濃度的情況下提高洗脫效率;

3、Protein A 純化蛋白需要注意什么?

要保證 Protein G 和抗體有充分的結(jié)合時間,抗體純度不夠會導(dǎo)致雜蛋白含量高、易引起蛋白沉淀。

北京百奧創(chuàng)新科技有限公司提供BioToolomics親和層析產(chǎn)品,更多有關(guān)親和層析產(chǎn)品及資料,請聯(lián)系百奧創(chuàng)新客服!


文件下載    圖片下載    
聯(lián)系方式

15522676233

(全國服務(wù)熱線)

北京市海淀區(qū)溫泉鎮(zhèn)創(chuàng)客小鎮(zhèn)社區(qū)配套商業(yè)樓

3007606172@qq.com

關(guān)注我們

Copyright © 2025北京百奧創(chuàng)新科技有限公司 All Rights Reserved   工信部備案號:京ICP備17019404號-2

技術(shù)支持:化工儀器網(wǎng)   管理登錄   sitemap.xml

關(guān)注

聯(lián)系
聯(lián)系
頂部
久久国产乱子伦精品免费乳及| 解开人妻的裙子猛烈进入| 国产精品久久久久久亚洲AV| 亚洲欧美国产日韩在线观看| 无码AV免费精品一区二区三区| 亚洲综合色婷婷六月丁香宅男大增| 伦理电影在线看| 中文字幕久无码免费久久| 欧美亚洲精品专区| 亚洲AV区无码字幕中文色| 日产国产精品亚洲系列| 又色又爽又黄18禁美女裸身无遮挡| 日韩中文麻豆专区| 综合图区亚洲欧美另类图片| 欧美日韩一级高清电影网站片| 99久久99久久精品免费看蜜桃| 毛片av在线免费观看| 欧美mv日韩mv亚洲精品| 日韩国产精品99久久久久久| 好吊色国产欧美日韩免费观看| 精品久久久无码中文字幕边打电话| 少妇养生馆SPA私密精油按摩| 国产精品88久久久久久| 日本人姓交大片| 久久久久久久精品视频| 国产精品九九久久精品| 欧美日韩中文在线视频| 久久久亚洲AV成人网站| 人妻丝袜AV中文系列先锋影音| 色先锋资源| 色欲欧美成人性色生活片| 国产欧美在线观看一区二区| 亚洲AV日韩AV天堂一区二区三区| av毛片app| 日韩欧美国产中文字幕| 猫咪WWW免费人成网站| 欧美日韩国产免费一区二区三区| 最新国产精品拍自在线播放| 国产成人一区二区三区不卡蜜臀| 久草小区二区三区四区网页| 无码人妻一区二区三区在线|